page_banner

Кількісне значення Ct виявлення флуоресценції нуклеїнової кислоти – параметр любові-ненависті

Кількісне значення Ct виявлення флуоресценції нуклеїнової кислоти – параметр любові-ненависті

«Нова програма діагностики та лікування коронарної пневмонії (дев’яте пробне видання)» використовує значення Ct виявлення нуклеїнової кислоти ≥35 як одну з важливих основ для звільнення від лікування або виписки.Отже, що означає значення Ct набору для виявлення нуклеїнових кислот?Чи можна порівняти значення Ct різних наборів?Чи нижче значення Ct, тим краща продуктивність набору?
Значення Ct (Threshold Cycle, Ct) — кількість циклів ПЛР, коли інтенсивність кількісного сигналу флуоресценції в реальному часі перевищує встановлений поріг.За приклад наборів для виявлення нуклеїнових кислот взято нову коронку.Для тієї самої реакції того самого набору для виявлення двох зразків, що містять вірус, A і B, розмір значення Ct певною мірою представляє кількість копій вірусного гена, тобто вірусне навантаження.Чим нижче Ct зразка B, тим вище вірусне навантаження.Значення Ct обернено пропорційне вірусному навантаженню та його інфекційності.Плюси та мінуси різних наборів для кількісного визначення флуоресценції в реальному часі не можна оцінювати лише за розміром значення Ct, оскільки значення Ct різних наборів не можна порівнювати.Оцінку продуктивності набору необхідно вимірювати з точки зору чутливості (мінімальна межа виявлення), специфічності, точності, стабільності та діагностичного застосування.У кожного виробника реагентів є свої вісімнадцять видів бойових мистецтв, і вони мають свою магічну силу в застосуванні, тому я не буду вдаватися в подробиці.
Для звичайних приладів/систем кількісного аналізу ПЛР (QPCR) у реальному часі отримання значень Ct та їх широке використання в програмах виявлення патогенів знайомі всім.З розвитком промисловості та вдосконаленням технологій обладнання та реагенти QPCR зіткнулися з можливостями та викликами.Yiou Think Tank (дослідницький звіт про індустрію генетичного тестування Китаю: технології за 2021 рік) проаналізував, що більшість компаній у галузі QPCR моєї країни стикаються з загальними проблемами, пов’язаними з технологією.У відповідь на ці проблеми рішення в основному поділяються на два типи: прискорення вдосконалення технології та розгортання нових технологій.
POCT для молекулярної діагностики QPCR є одним із напрямків розвитку галузі, а покращення продуктивності є важливим фактором для прискорення застосування технології.Як оптимізувати значення Ct ключового параметра окремої реакції в дослідженнях і розробках для обладнання POCT із пропускною здатністю QPCR для одного зразка?Те саме обладнання, та сама реакційна система та та сама концентрація матриці, теоретично, чим більше значення Ct однієї реакції, тим нижча ефективність ферменту в реакції.
У процесі підвищення ефективності ферментної реакції та оптимізації значення Ct спочатку можна проаналізувати типову криву кількісної ампліфікації флуоресценції за 40 циклів ПЛР.Крива ампліфікації на малюнку нижче поділяється на фонову фазу флуоресценції, експоненціальну фазу ампліфікації, лінійну фазу та фазу плато.Щоб досягти нижчого фону флуоресценції, наскільки це можливо, щоб відрізнити його від значення флуоресценції ранньої експоненціальної ампліфікації, необхідно перевірити носій реакційних витратних матеріалів, скринінг конструкції праймерного зонда та реакційну буферну систему.Експоненціальний період ампліфікації є найбільш прямою реакцією активності ферменту, а також є доказом ідеальної координації обладнання POCT, носіїв реакції та реагентів.У цей час контроль температури обладнання, отримання та аналіз оптичного сигналу, біосумісність носіїв і продуктивність системи реагентів повинні бути налаштовані та перевірені в усіх аспектах.Нарешті, повна ампліфікація завершена, і результати повинні бути представлені за допомогою строгого алгоритму даних, щоб отримати прийнятне значення Ct.
лінія КТ
Маленьким кроком в оптимізації значення Ct є незліченна кількість кроків персоналу R&D.У тривозі і хвилюванні дня і ночі, щоразу «ніде не видно гір і річок, темні верби і яскраві квіти, і є інше село», що дає нам сміливість і пристрасть рухатися вперед знову.


Час публікації: 29 вересня 2022 р